Mapa del proteoma de parásitos de Leishmania Viannia a partir de electroforesis de geles de poliacramida en dos dimensiones y otras técnicas asociadas

Rafael Góngora, Nathalie Acestor, Manfredo Quadroni, Nicolas Fasel, Nancy G. Saravia, John Walker, .

Palabras clave: proteómica, proteoma, Leishmania, electroforesis de geles de poliacrilamida en dos dimensiones

Resumen

En este estudio demostramos el potencial de la electroforesis en dos dimensiones (2DE) como herramienta para la caracterización del proteoma de Leishmania (expresión proteica complementaria del genoma). Los proteomas por 2DE en el rango neutro (pH 5-7) de extractos solubles de promastigotes de Leishmania (Viannia) guyanensis y Leishmania (Viannia) panamensis fueron reproducibles usando tampón de lisis de urea y nonidet P-40. Con la tinción de azul de Coomassie y nitrato de plata se detectaron, con buena resolución, 800 y 1.500 puntos de proteínas, respectivamente. Entre las proteínas de referencia comunes, aisladas de los proteomas de las cepas estudiadas, se identificaron por medio de espectrometría de masa de péptidos (LC-ES-MS/MS) y métodos bioinformáticos, proteínas de choque térmico, proteína ribosomal S12, proteína de membrana del cinetoplasto 11 y una proteína hipotética específica de Leishmania de 13 kDa con función desconocida. Por inmunoblot y utilizando un anticuerpo monoclonal, se detectaron específicamente las proteínas paraflagelar 1 y 2 de 81,4 kDa y 77,5 kDa, respectivamente. La expresión proteica diferencial encontrada en los distintos clones de parásitos fueron reproducibles al ser comparados por medio de un programa analizador de imágenes. Estos datos demuestran el poder de resolución del análisis de proteomas por 2DE. La producción y caracterización de mapas proteicos básicos de Leishmania con buena calidad constituye un paso esencial en los estudios proteómicos comparativos orientados a la identificación de factores moleculares involucrados en la resistencia a drogas, virulencia de parásitos y el descubrimiento de blancos para nuevas drogas y vacunas.

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  • Rafael Góngora Centro Internacional de Entrenamiento e Investigaciones Médicas, CIDEIM, Cali,
  • Nathalie Acestor Institute of Biochemistry and Protein Analysis Facility, University of Lausanne, Epalinges.
  • Manfredo Quadroni Institute of Biochemistry and Protein Analysis Facility, University of Lausanne, Epalinges.
  • Nicolas Fasel Institute of Biochemistry and Protein Analysis Facility, University of Lausanne, Epalinges.
  • Nancy G. Saravia Centro Internacional de Entrenamiento e Investigaciones Médicas, CIDEIM, Cali,
  • John Walker Centro Internacional de Entrenamiento e Investigaciones Médicas, CIDEIM, Cali,
Cómo citar
Góngora, R., Acestor, N., Quadroni, M., Fasel, N., Saravia, N. G., & Walker, J. (2003). Mapa del proteoma de parásitos de Leishmania Viannia a partir de electroforesis de geles de poliacramida en dos dimensiones y otras técnicas asociadas. Biomédica, 23(2), 153-60. https://doi.org/10.7705/biomedica.v23i2.1207
Publicado
2003-06-01
Sección
Artículos originales