Diseño de dos metodologías moleculares para la rápida identificación de aislamientos de Staphylococcus aureus resistente a meticilina asociados a la comunidad en Colombia

Javier Antonio Escobar, Ingrid Tatiana Gómez, Martha Johanna Murillo, Betsy Esperanza Castro, Bibiana Chavarro, Ricaurte Alejandro Márquez, Natasha Vanegas, .

Palabras clave: Staphylococcus aureus resistente a meticilina, infecciones comunitarias adquiridas, técnicas de tipificación bacteriana, tipificación de secuencias multilocus, sequence typing, enterotoxinas

Resumen

Introducción. Los aislamientos de Staphylococcus aureus resistente a la meticilina asociado a la comunidad (SARM-AC), están aumentando la frecuencia de infecciones en personas sanas de la comunidad y en pacientes hospitalizados. En Colombia y en la región andina estos aislamientos tienen un componente genético relacionado con el clon pandémico USA300.

Objetivo. Diseñar y estandarizar dos metodologías para la diferenciación rápida de aislamientos colombianos de S. aureus resistente a la meticilina asociado a la comunidad de los asociados al hospital (SARM-AH).

Materiales y métodos. Se estandarizaron dos metodologías moleculares para la identificación de aislamientos de S. aureus resistente a la meticilina asociado a la comunidad. La primera se basa en la digestión diferencial con tres enzimas de restricción de los genes cinasa de carbamato (arcC) y cinasa de guanilato (gmk) para los tipos de secuencia 5 (ST5) y 8 (ST8), correspondientes a aislamientos de S. aureus resistente a la meticilina asociado al hospital y asociado a la comunidad, respectivamente. La segunda se basa en la amplificación por reacción en cadena de la polimerasa de cinco factores de virulencia que se encuentran de manera diferencial en estos aislamientos. Las dos metodologías fueron validadas en 237 aislamientos clínicos de S. aureus resistente a la meticilina.

Resultados. Con la primera metodología se identificaron el 100 % y 93,2 % de los aislamientos de S. aureus resistente a la meticilina asociado a la comunidad y asociado al hospital, respectivamente. Con la segunda metodología se identificaron correctamente los dos tipos de aislamientos.

Conclusiones. Estas dos metodologías son una buena alternativa en términos de ahorro en tiempo y dinero comparadas con otras técnicas, como la electroforesis en campo pulsado y la tipificación de secuencias multilocus para la rápida identificación de aislamientos de S. aureus resistente a la meticilina asociado a la comunidad en Colombia.

 

doi: http://dx.doi.org/10.7705/biomedica.v32i2.645

 

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  • Javier Antonio Escobar Laboratorio de Genética Molecular Bacteriana, Universidad El Bosque, Bogotá, D.C., Colombia
  • Ingrid Tatiana Gómez Laboratorio de Genética Molecular Bacteriana, Universidad El Bosque, Bogotá, D.C., Colombia
  • Martha Johanna Murillo Laboratorio de Genética Molecular Bacteriana, Universidad El Bosque, Bogotá, D.C., Colombia
  • Betsy Esperanza Castro Laboratorio de Genética Molecular Bacteriana, Universidad El Bosque, Bogotá, D.C., Colombia
  • Bibiana Chavarro Laboratorio de Genética Molecular Bacteriana, Universidad El Bosque, Bogotá, D.C., Colombia
  • Ricaurte Alejandro Márquez Laboratorio de Genética Molecular Bacteriana, Universidad El Bosque, Bogotá, D.C., Colombia
  • Natasha Vanegas Laboratorio de Genética Molecular Bacteriana, Universidad El Bosque, Bogotá, D.C., Colombia

Referencias bibliográficas

Udo EE, Pearman JW, Grubb WB. Genetic analysis of community isolates of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Western Australia. J Hosp Infect. 1993;25:97-108. doi: http://dx.doi.org/10.1016/0195-6701(93)90100-E

Deleo FR, Otto M, Kreiswirth BN, Chambers HF. Community-associated meticillin-resistant Staphylococcus aureus. Lancet. 2010:375:1557-68. doi: http://dx.doi.org/10.1016/S0140-6736(09)61999-1

Popovich KJ, Weinstein RA, Hota B. Are communityassociated methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) strains replacing traditional nosocomial MRSA strains? Clin Infect Dis. 2008;46:787-94. doi: http://dx.doi.org/10.1086/528716

Álvarez CA, Yomayusa N, Leal AL, Moreno J, MéndezÁlvarez S, Ibáñez M, et al. Nosocomial infections caused by community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Colombia. Am J Infect Control. 2010;38:315-8. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.ajic.2009.05.013

Diep BA, Palazzolo-Ballance AM, Tattevin P, Basuino L, Braughton KR, Whitney AR, et al. Contribution of Panton-Valentine leukocidin in community-associated methicillinresistant Staphylococcus aureus pathogenesis. PLoS One. 2008;3:e3198. doi: http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0003198

Wang R, Braughton KR, Kretschmer D, Bach TH, Queck SY, Li M, et al. Identification of novel cytolytic peptides as key virulence determinants for community-associated MRSA. Nat Med. 2007;13:1510-4. doi: http://dx.doi.org/10.1038/nm1656

Sola C, Saka HA, Vindel A, Bocco JL. Emergence and dissemination of a community-associated methicillin-resistant Panton-Valentine leucocidin-positive Staphylococcus aureus clone sharing the sequence type 5 lineage with the most prevalent nosocomial clone in the same region of Argentina. J Clin Microbiol. 2008;46:1826-31. doi: http://dx.doi.org/10.1128/JCM.01949-07

Gardella N, von Specht M, Cuirolo A, Rosato A, GutkindG, Mollerach M. Community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus, eastern Argentina. Diagn Microbiol Infect Dis. 2008;62:343-7. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.diagmicrobio.2008.07.008

Chavarro B. Determinación de la presencia y transcripción de factores de virulencia en aislamientos colombianos de Staphylococcus aureus resistente a meticilina adquirido en la comunidad. Bogotá: Facultad de Medicina, Universidad El Bosque; 2009.

Reyes J, Rincon S, Díaz L, Panesso D, Contreras GA, Zurita J, et al. Dissemination of methicillin-resistant Staphylococcus aureus USA300 sequence type 8 lineage in Latin America. Clin Infect Dis. 2009;49:1861-7. doi: http://dx.doi.org/10.1086/648426

Tenover FC, Arbeit RD, Goering RV, Mickelsen PA, Murray BE, Persing DH, et al. Interpreting chromosomal DNA restriction patterns produced by pulsed-field gel electrophoresis: Criteria for bacterial strain typing. J Clin Microbiol. 1995;33:2233-9. PMid:7494007 PMCid:228385

Tristan A, Ferry T, Durand G, Dauwalder O, Bes M, Lina G, et al. Virulence determinants in community and hospital meticillin-resistant Staphylococcus aureus. J Hosp Infect. 2007;65(Suppl.2):105-9. doi: http://dx.doi.org/10.1016/S0195-6701(07)60025-5

Tenover FC, McDougal LK, Goering RV, Killgore G, Projan SJ, Patel JB, et al. Characterization of a strain of community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus widely disseminated in the United States. J Clin Microbiol. 2006;44:108-18. doi: http://dx.doi.org/10.1128/JCM.44.1.108-118.2006

Deurenberg RH, Stobberingh EE. The evolution of Staphylococcus aureus. Infect Genet Evol. 2008;8:747-63. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.meegid.2008.07.007

PMid:18718557

Enright MC, Day NP, Davies CE, Peacock SJ, Spratt BG. Multilocus sequence typing for characterization of methicillin-resistant and methicillin-susceptible clones of Staphylococcus aureus. J Clin Microbiol. 2000;38:1008-15. PMid:10698988 PMCid:86325

Bikandi J, San Millan R, Rementeria A, Garaizar J. In silico analysis of complete bacterial genomes: PCR, AFLP-PCR and endonuclease restriction. Bioinformatics. 2004;20:798-9. doi: http://dx.doi.org/10.1093/bioinformatics/btg491

Vincze T, Posfai J, Roberts RJ. NEBcutter: A program to cleave DNA with restriction enzymes. Nucleic Acids Res. 2003;31:3688-91. doi: http://dx.doi.org/10.1093/nar/gkg526

Rozen S, Skaletsky H. Primer3 on the WWW for general users and for biologist programmers. Methods Mol Biol. 2000;132:365-86. PMid:10547847

Krawetz SA, Womble DD. Design and implementation of an introductory course for computer applications in molecular genetics. A case study. Mol Biotechnol. 2001;17:27-41. doi: http://dx.doi.org/10.1385/MB:17:1:27

Jarraud S, Mougel C, Thioulouse J, Lina G, Meugnier H, Forey F, et al. Relationships between Staphylococcus aureus genetic background, virulence factors, agr groups (alleles), and human disease. Infect Immun. 2002;70:631-41. doi: http://dx.doi.org/10.1128/IAI.70.2.631-641.200

Diep BA, Gill SR, Chang RF, Phan TH, Chen JH, Davidson MG, et al. Complete genome sequence of USA300, an epidemic clone of community-acquired meticillin-resistant Staphylococcus aureus. Lancet. 2006;367:731-9. doi: http://dx.doi.org/10.1016/S0140-6736(06)68231-7

Miller LG, Perdreau-Remington F, Rieg G, Mehdi S, Perlroth J, Bayer AS, et al. Necrotizing fasciitis caused by community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Los Angeles. N Engl J Med. 2005;352:1445-53. doi: http://dx.doi.org/10.1056/NEJMoa042683

Álvarez-Olmos MI, Enríquez SP, Pérez-Roth E, MéndezÁlvarez S, Escobar J, Vanegas N, et al. Pediatric cases from Colombia caused by a panton-valentine leukocidinpositive community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus ST8-SCCmecIVc clone. Pediatr Infect Dis J. 2009;28:935. doi: http://dx.doi.org/10.1097/INF.0b013e3181b2102b

Bonnstetter KK, Wolter DJ, Tenover FC, McDougal LK, Goering RV. Rapid multiplex PCR assay for identification of USA300 community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolates. J Clin Microbiol. 2007;45:141-6. doi: http://dx.doi.org/10.1128/JCM.01228-06

Strommenger B, Braulke C, Pasemann B, Schmidt C, Witte W. Multiplex PCR for rapid detection of Staphylococcus aureus isolates suspected to represent community-acquired strains. J Clin Microbiol. 2008;46:582-7. doi: http://dx.doi.org/10.1128/JCM.01600-07

Diep BA, Perdreau-Remington F, Sensabaugh GF. Clonal characterization of Staphylococcus aureus by multilocus restriction fragment typing, a rapid screening approach for molecular epidemiology. J Clin Microbiol. 2003;41:4559-64. doi: http://dx.doi.org/10.1128/JCM.41.10.4559-4564.2003

Baba T, Bae T, Schneewind O, Takeuchi F, Hiramatsu K. Genome sequence of Staphylococcus aureus strain Newman and comparative analysis of staphylococcal genomes: Polymorphism and evolution of two major pathogenicity islands. J Bacteriol. 2008;190:300-10. doi: http://dx.doi.org/10.1128/JB.01000-07

Fossum AE, Saltyte J, Alm-Kristiansen K, Bukholm G. Exotoxin-encoding gene content in community-acquired and hospital-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Clin Microbiol Infect. 2009;15:1139-45. doi: http://dx.doi.org/10.1111/j.1469-0691.2009.02745.x

de Miranda OP, Silva-Carvalho MC, Ribeiro A, Portela F, Cordeiro RP, Caetano N, et al. Emergence in Brazil of methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolates carrying SCCmecIV that are related genetically to the USA800 clone. Clin Microbiol Infect. 2007;13:1165-72. doi: http://dx.doi.org/10.1111/j.1469-0691.2007.01830.x

Rodríguez-Noriega E, Seas C, Guzmán-Blanco M, Mejía C, Álvarez C, Bavestrello L, et al. Evolution of methicillinresistant Staphylococcus aureus clones in Latin America. Int J Infect Dis. 2010;14:e560-6. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.ijid.2009.08.018

Cómo citar
1.
Escobar JA, Gómez IT, Murillo MJ, Castro BE, Chavarro B, Márquez RA, et al. Diseño de dos metodologías moleculares para la rápida identificación de aislamientos de Staphylococcus aureus resistente a meticilina asociados a la comunidad en Colombia. biomedica [Internet]. 30 de junio de 2012 [citado 29 de marzo de 2024];32(2):214-23. Disponible en: https://revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/645
Publicado
2012-06-30
Sección
Artículos originales

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