PCR-RFLP y RAPD para la tipificación de Leishmania neotropical

  • Ana Margarita Montalvo Departamento de Parasitología, Instituto Pedro Kourí, La Habana, Cuba
  • Lianet Monzote Departamento de Parasitología, Instituto Pedro Kourí, La Habana, Cuba
  • Jorge Fraga Departamento de Parasitología, Instituto Pedro Kourí, La Habana, Cuba
  • Ivón Montano Departamento de Parasitología, Instituto Pedro Kourí, La Habana, Cuba
  • Carlos Muskus Programa de Estudio y Control de Enfermedades Tropicales (PECET), Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Marcel Marín Programa de Estudio y Control de Enfermedades Tropicales (PECET), Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Simonne De Donck Institute of Tropical Medicine, Molecular Parasitology Lab, Nationaalstraat, Antwerp, Belgium
  • Iván Darío Vélez Programa de Estudio y Control de Enfermedades Tropicales (PECET), Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Jean Claude Dujardin Institute of Tropical Medicine, Molecular Parasitology Lab, Nationaalstraat, Antwerp, Belgium
Palabras clave: Leishmania, leishmaniasis/diagnóstico, reacción en cadena de la polimerasa, polimorfismo de longitud del fragmento de restricción

Resumen

Introducción. El análisis de la longitud de los fragmentos de restricción del producto amplificado y el estudio del ADN polimórfico amplificado al azar han demostrado ser herramientas útiles para la tipificación de Leishmania.
Objetivos. Estudiar la utilidad de las técnicas moleculares para la identificación y tipificación de cepas de referencia de Leishmania spp. del Nuevo Mundo y valorar su aplicabilidad a muestras clínicas.
Materiales y métodos. Se aplicó PCR para amplificar el gen que codifica la cisteíno-proteinasa B, y el análisis de la longitud de los fragmentos de restricción del producto amplificado utilizando ácido desoxirribonucleico de 16 cepas de referencia de Latinoamérica y de muestras clínicas de pacientes colombianos con leishmaniasis, y la técnica del ácido desoxirribonucleico polimórfico amplificado al azar utilizando ocho cepas de referencia. Se establecieron los patrones de bandas en cada caso.
Resultados. Se obtuvo producto de amplificación en la PCR para Leishmania braziliensis, L. peruviana, L. panamensis y L. guyanensis. Para el resto, no fue posible amplificar el gen con los cebadores utilizados. La restricción mostró un patrón de bandas común para L. peruviana, L. guyanensis y L. panamensis, mientras L. braziliensis, presentaba un perfil individual único. El análisis de restricción del producto amplificado generó un patrón de bandas similar en los cinco pacientes estudiados, que se correspondía con el patrón generado por L. peruviana, L. guyanensis o L. panamensis. Mediante la amplificación al azar se obtuvieron patrones de bandas reproducibles con todas las cepas estudiadas, que posibilitaron la diferenciación. Se discuten las ventajas y limitaciones de ambos procederes. Conclusiones. El combinar ambas metodologías resultaría útil para identificar especies de importancia médica, tomando en cuenta sus ventajas y desventajas.

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Cómo citar
Montalvo, A. M., Monzote, L., Fraga, J., Montano, I., Muskus, C., Marín, M., De Donck, S., Vélez, I. D., & Dujardin, J. C. (1). PCR-RFLP y RAPD para la tipificación de Leishmania neotropical. Biomédica, 28(4), 597-606. https://doi.org/10.7705/biomedica.v28i4.66
Sección
Nota técnica