TY - JOUR AU - Marin, Johana AU - Urrea, Daniel AU - Muskus, Carlos AU - Echeverry, María Clara AU - Mejía, Ana María AU - Triana, Omar PY - 2017/12/01 Y2 - 2024/03/28 TI - Curvas de fusión de regiones genómicas específicas: una herramienta prometedora para el diagnóstico y tipificación de las especies causantes de la leishmaniasis cutánea en Colombia JF - Biomédica JA - biomedica VL - 37 IS - 4 SE - Artículos originales DO - 10.7705/biomedica.v37i4.3634 UR - https://revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/3634 SP - 538-547 AB - <p>Introducción. La leishmaniasis cutánea es una enfermedad causada por parásitos del género <em>Leishmania</em> que tiene gran incidencia en Colombia. El diagnóstico y la identificación de la especie infecciosa son factores críticos en el momento de escoger e iniciar el tratamiento. Actualmente, los métodos de diagnóstico y tipificación requieren procedimientos complejos, por lo que es necesario validar nuevos marcadores moleculares y métodos que simplifiquen el proceso.<br />Objetivo. Desarrollar una herramienta basada en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con curvas de fusión (<em>High Resolution Melting</em>; PCR-HRM) para el diagnóstico y tipificación de las tres especies de Leishmania de importancia epidemiológica en casos de leishmaniasis cutánea en Colombia.<br />Materiales y métodos. Los genomas de <em>Leishmania panamensis</em>, <em>L. braziliensis</em> y <em>L. guyanensis</em> se compararon mediante métodos bioinformáticos. Las regiones específicas de especie identificadas se validaron mediante PCR. Para los marcadores seleccionados se diseñó una PCR-HRM y se estimaron algunos parámetros de validez y seguridad usando aislamientos de pacientes colombianos caracterizados previamente mediante PCR y análisis de polimorfismos en la longitud de los fragmentos de restricción (<em>Restriction Fragment Length Polymorphism</em> – RFLP; PCR-RFLP) del gen <em>hsp</em>70.<br />Resultados. El análisis genómico comparativo mostró 24 regiones específicas de especie. Sin embargo, la validación mediante PCR solo identificó un marcador específico para cada especie de <em>Leishmania</em>. Los otros marcadores mostraron amplificación cruzada. El límite de detección para los tres marcadores seleccionados fue de un parásito, mientras que la sensibilidad, la especificidad, el valor predictivo positivo y el negativo fueron de 91,4, 100, 100 y 75 %, respectivamente.<br />Conclusiones. Las tres regiones seleccionadas pueden emplearse como marcadores moleculares en el diagnóstico y tipificación de las especies causantes de la leishmaniasis cutánea en Colombia.</p> ER -