Obtención de una sonda específica para evaluar la transcripción del gen STAT5b

Luis Eduardo Díaz, Blanca L. Ortiz, Myriam Sánchez de Gómez, .

Palabras clave: RT-PCR, GH, STAT5b, hibridización en solución

Resumen

Se describe la estrategia empleada para clonar, en un vector de expresión, un fragmento de 306 pb del gen de STAT5b de rata, amplificado por la técnica de RT-PCR. Se amplificó una región en el terminal 3' donde se encuentra la mayor diferencia entre las secuencias del cADN de las isoformas STAT5a y STAT5b de rata. La clonación se logró utilizando el nuevo sistema TOPO-TA recomendado para productos de dificil clonación. El fragmento se subclonó en el vector pBlueScript II SK y se caracterizó mediante secuenciación y análisis de restricción. La subclonación se realizó con el propósito de poder obtener sondas sentido y antisentido de ARN por transcripción in vitro. Esta sonda específica se empleó para cuantificar niveles de mARN de STAT5b en hígado de ratas macho mediante la técnica de hibridización en solución o ensayo de protección de ARNasas.

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  • Luis Eduardo Díaz Laboratorio de Hormonas, Departamento de Química, Universidad Nacional de Colombia, Bogotá, D.C.
  • Blanca L. Ortiz Laboratorio de Hormonas, Departamento de Química, Universidad Nacional de Colombia, Bogotá, D.C.
  • Myriam Sánchez de Gómez Laboratorio de Hormonas, Departamento de Química, Universidad Nacional de Colombia, Bogotá, D.C.
Cómo citar
1.
Díaz LE, Ortiz BL, Sánchez de Gómez M. Obtención de una sonda específica para evaluar la transcripción del gen STAT5b. biomedica [Internet]. 1 de junio de 2001 [citado 3 de diciembre de 2022];21(2):142-9. Disponible en: https://revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/1102
Publicado
2001-06-01
Sección
Artículos originales
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