Producción y evaluación del antígeno recombinante TES-30 de Toxocara canis para el inmunodiagnóstico de toxocariasis

Ana M. Olave, Jairo A. Mesa, Jorge H. Botero, Edwin B. Patiño, Gisela M. García, Juan F. Alzate, .

Palabras clave: Toxocara canis, toxocariasis/diagnóstico, antígeno, pruebas inmunológicas

Resumen

Introducción. Toxocara canis es un nematodo patógeno de cánidos que accidentalmente puede ser transmitido a los humanos. A pesar de la importancia de la serología para el diagnóstico de esta zoonosis, los kits diagnósticos usan antígenos crudos de excreción-secreción, en su mayoría glucoproteínas que no son específicas de especie, por lo cual pueden presentarse reacciones cruzadas con anticuerpos generados contra otros parásitos.
Objetivos. Producir el antígeno recombinante TES-30 de T. canis y evaluarlo para el inmunodiagnóstico de la toxocariasis.
Materiales y métodos. Se clonó el gen que codifica TES-30 en el vector de expresión pET28a (+), usando oligonucleótidos de cadena sencilla unidos mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La proteína rTES-30 se purificó por cromotografia de afinidad (Ni2+). La reacción serológica de rTES-30 se evaluó mediante immunoblot. Teniendo en cuenta que no existe una prueba de referencia, se observó el comportamiento del antigeno en comparación con la prueba de rutina para el inmunodiagnóstico de la toxocariasis, es decir, la técnica ELISA convencional con antígenos de excreción-secreción.
Resultados. El rTES-30 se produjo a partir de un cultivo de Escherichia coli LB, con un rendimiento de 2,25 mg/l y 95 % de pureza. La concordancia de la reacción entre el immunoblot rTES-30 y la ELISA convencional, fue de 73 % (46/63) y de 100 % con los 21 sueros no reactivos. De los 21 sueros con diagnóstico de otras parasitosis, 19 fueron reactivos con ELISA, mientras que tan solo siete fueron positivos con el immunoblot rTES-30. La concordancia entre la ELISA y el immunoblot fue moderada (índice kappa de 0,575; IC95% 0,41-0,74).
Conclusiones. Los datos presentados respaldan la utilidad del immunoblot rTES-30 para la confirmación de los posibles positivos por ELISA, no solo en los estudios epidemiológicos, sino también, como candidato para el desarrollo de pruebas diagnósticas de la toxocariasis ocular en Colombia.

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  • Ana M. Olave Grupo de Parasitología, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Jairo A. Mesa Grupo de Parasitología, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Jorge H. Botero Grupo de Parasitología, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Edwin B. Patiño Instituto de Química, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Gisela M. García Grupo de Parasitología, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Juan F. Alzate Grupo de Parasitología, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia

Citas

Schantz PM, Glickman LT. Ascarids of cats and dogs: A public health and veterinary medicine problem. Bol Of Sanit Panam. 1983;94:571-86.

Botero JHM, Cañas L, Bravo JD, Lopera MON. Frecuencia de toxocarosis ocular en menores de edad remitidos al servicio de parasitología intestinal - Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia; 2000-2001. Estudio piloto. Acta Médica Colomb. 2001;26:11-20.

Despommier D. Toxocariasis: Clinical aspects, epidemiology, medical ecology, and molecular aspects. Clin Microbiol Rev. 2003;16:265-72. http://dx.doi.org/10.1128/CMR.16.2.265-272.2003

Doligalska M, Donskow K. Environmental contamination with helminth infective stages implicated in water and foodborne diseases. Acta Microbiol Pol. 2003;52 (Suppl.): 45- 56.

Schwartzbrod J, Banas S. Parasite contamination of liquid sludge from urban wastewater treatment plants. Water Sci Technol. 2003;47:163-6.

Sprent JF. Observations on the development of Toxocara canis (Werner, 1782) in the dog. Parasitology. 1958;48: 184- 209.

Sprent JF. On the migratory behavior of the larvae of various Ascaris species in white mice. I. Distribution of larvae in tissues. J Infect Dis. 1952;90:165-76.

Nichols RL. The etiology of visceral larva migrans. I. Diagnostic morphology of infective second-stage Toxocara larvae. J Parasitol. 1956;42:349-62.

Magnaval JF, Glickman LT, Dorchies P, Morassin B. Highlights of human toxocariasis. Korean J Parasitol. 2001;39:1-11. http://dx.doi.org/10.3347/kjp.2001.39.1.1

Pawlowski Z. Toxocariasis in humans: Clinical expression and treatment dilemma. J Helminthol. 2001;75:299-305. http://dx.doi.org/10.1017/S0022149X01000464

Schantz PM, Glickman LT. Toxocaral visceral larva migrans. N Engl J Med. 1978;298:436-9. http://dx.doi.org/10.1056/NEJM197802232980806

Minvielle MC, Niedfeld G, Ciarmela ML, Basualdo JA. Toxocariasis caused by Toxocara canis: Clinico-epidemiological aspects. Enferm Infecc Microbiol Clin. 1999;17:300-6.

Barriga OO. A critical look at the importance, prevalence and control of toxocariasis and the possibilities of immunological control. Vet Parasitol. 1988;29:195-234. http://dx.doi.org/10.1016/0304-4017(88)90126-4

Macpherson CN. The epidemiology and public health importance of toxocariasis: A zoonosis of global importance. Int J Parasitol. 2013;43:999-1008. http://dx.doi.org/10.1016/j.ijpara.2013.07.004

Berrocal J. Prevalence of Toxocara canis in babies and in adults as determined by the ELISA test. Trans Am Ophthalmol Soc. 1980;78:376-413.

Cancrini G, Bartoloni A, Zaffaroni E, Guglielmetti P, Gamboa H, Nicoletti A, et al. Seroprevalence of Toxocara canis -IgG antibodies in two rural Bolivian communities. Parassitologia. 1998;40:473-5.

Alonso JM, Bojanich M V, Chamorro M, Gorodner JO. Toxocara seroprevalence in children from a subtropical city in Argentina. Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 2000;42:235-7. http://dx.doi.org/10.1590/S0036-46652000000400010

García-Pedrique ME, Díaz-Suárez O, Estévez J, Cheng NR, Araújo- Fernández M, Castellano J, et al . Prevalencia de infección por Toxocara en pre-escolares de una comu- nidad educativa de El Moján, estado Zulia, Venezuela. Resultados preliminares. Invest Clin. 2004;45:347-54.

Fillaux J, Santillán G, Magnaval JF, Jensen O, Larrieu E, Sobrino-Becaria CD. Epidemiology of toxocariasis in a steppe environment: The Patagonia study. Am J Trop Med Hyg. 2007;76:1144-7.

Espinoza YA, Huapaya PE, Roldán WH, Jiménez S, Abanto EP, Rojas CA, et al . Seroprevalence of human toxocariasis in Andean communities from the Northeast of Lima, Perú. Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 2010;52:31-6. http://dx.doi.org/10.1590/S0036-46652010000100005

Correa M, González M, D´Alessandro A. Primer caso colombiano de toxocariasis. Breve actualización del síndrome de la larva migrans visceral. Antioquia Méd. 1966;16:489-97.

Agudelo C, Villareal E, Cáceres E, López C, Eljach J, Ramírez N, et al . Human and dogs Toxocara canis infection in a poor neighborhood in Bogotá. Mem Inst Oswaldo Cruz. 1990;85:75-8. http://dx.doi.org/10.1590/S0074-02761990000100012

Acero M, Muñoz M, Flórez A, Nicholls R. Seroprevalencia de anticuerpos contra Toxocara canis y factores de riesgo en niños. Ciudad Bolívar, Bogotá, DC, 2001. Biomédica. 2001;21:256-63. http://dx.doi.org/10.7705/biomedica.v21i3.1116

Flórez A, Correa M. Situación de la toxocariasis en Colombia, enero de 1996, enero de 2002. Inf Quinc Epidemiol Nac. 2002;7:375-84. Fecha de consulta: 10 de julio de 2015. Disponible en: http://www.ins.gov.co/iqen/IQUEN/IQEN%20vol%2007%202002%20num%2020.pdf.

Fillaux J, Magnaval JF. Laboratory diagnosis of human toxocariasis. Vet Parasitol. 2013;193:327-36. http://dx.doi.org/10.1016/j.vetpar.2012.12.028

Roldán WH, Espinoza YA, Huapaya PE, Jiménez S. Diagnóstico de la toxocarosis humana. Rev Peru Med Exp Salud Pública. 2010;27:613-20. http://dx.doi.org/10.1590/S1726-46342010000400019

Moreira GMSG, Telmo P de L, Mendonça M, Moreira ÂN, McBride AJA, Scaini CJ, et al . Human toxocariasis: Current advances in diagnostics, treatment, and inter-ventions. Trends Parasitol. 2014;30:456-64. http://dx.doi.org/10.1016/j.pt.2014.07.003

Lee S-U, Yu J-R, Huh S. Ultrastructural localization of Toxocara canis larval antigen reacted with a seropositive human serum. Korean J Parasitol. 2009;47:65–8. http://dx.doi.org/10.3347/kjp.2009.47.1.65

Yamasaki H, Araki K, Lim PK, Zasmy N, Mak JW, Taib R, et al. Development of a highly specific recombinant Toxocara canis second-stage larva excretory-secretory antigen for immunodiagnosis of human toxocariasis. J Clin Microbiol. 2000;38:1409-13.

Mohamad S, Azmi NC, Noordin R. Development and evaluation of a sensitive and specific assay for diagnosis of human toxocariasis by use of three recombinant antigens (TES-26, TES-30USM, and TES-120). J Clin Microbiol. 2009;47:1712-7. http://dx.doi.org/10.1128/JCM.00001-09

Noordin R, Smith HV, Mohamad S, Maizels RM, Fong MY. Comparison of IgG-ELISA and IgG4-ELISA for Toxocara serodiagnosis. Acta Trop. 2005;93:57-62. http://dx.doi.org/10.1016/j.actatropica.2004.09.009

Sambrook J, W Russell D. Molecular cloning: A laboratory manual. Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harb Lab Press; 2001. p. 999.

Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227:680-5. http://dx.doi.org/10.1038/227680a0

Maizels RM, de Savigny D, Ogilvie BM. Characterization of surface and excretory-secretory antigens of Toxocara canis infective larvae. Parasite Immunol. 1984;6:23-37.

Badley JE, Grieve RB, Bowman DD, Glickman LT, Rockey JH. Analysis of Toxocara canis larval excretory-secretory antigens: Physicochemical characterization and antibody recognition. J Parasitol. 1987;73:593-600. http://dx.doi.org/10.2307/3282142

Tetteh KK, Loukas A, Tripp C, Maizels RM. Identification of abundantly expressed novel and conserved genes from the infective larval stage of Toxocara canis by an expressed sequence tag strategy. Infect Immun. 1999;67:4771-9.

Wickramasinghe S, Yatawara L, Nagataki M, Takamoto M, Watanabe Y, Rajapakse RP, et al . Development of a highly sensitive IgG-ELISA based on recombinant arginine kinase of Toxocara canis for serodiagnosis of visceral larva migrans in the murine model. Parasitol Res. 2008;103:853-8. http://dx.doi.org/10.1007/s00436-008-1067-4

Norhaida A, Suharni M, Liza AT, Tuda J, Rahmah N. rTES-30USM: Cloning via assembly PCR, expression, and evaluation of usefulness in the detection of toxocariasis. Ann Trop Med Parasitol. 2008;102:151-60. http://dx.doi.org/10.1179/136485908X252250

Maizels RM, Kennedy MW, Meghji M, Robertson BD, Smith HV. Shared carbohydrate epitopes on distinct surface and secreted antigens of the parasitic nematode Toxocara canis . J Immunol. 1987;139:207-14.

Meghji M, Maizels RM. Biochemical properties of larval excretory-secretory glycoproteins of the parasitic nematode Toxocara canis. Mol Biochem Parasitol. 1986;18:155-70. http://dx.doi.org/10.1016/0166-6851(86)90035-6

Cómo citar
Olave, A. M., Mesa, J. A., Botero, J. H., Patiño, E. B., García, G. M., & Alzate, J. F. (2016). Producción y evaluación del antígeno recombinante TES-30 de Toxocara canis para el inmunodiagnóstico de toxocariasis. Biomédica, 36(1), 39-51. https://doi.org/10.7705/biomedica.v36i1.2617
Publicado
2016-03-01
Sección
Artículos originales