Estandarización del uso de zimosán como estímulo adicional en la técnica de la 1,2,3- dihidrorrodamina para la evaluación de estallido respiratorio del neutrófilo

Resumen

Introducción. La enfermedad granulomatosa crónica (EGC) es un defecto de la fagocitosis por deficiencia de gp91phox, p22phox, p47phox, p40phox y p67phox (EGC-clásica). Recientemente se describieron la deficiencia de EROS y p40phox como responsables de la EGC no clásica. La técnica de oxidación de la 1,2,3-dihidrorrodamina (DHR) usando como estímulo el forbol-12-miristato-13-acetato (PMA) se realiza para el diagnóstico de EGC clásica. Sin embargo, EROS y p40phox requieren para su detección, el empleo de estímulos como zimosán, Escherichia coli o Staphylococcus aureus.
Objetivo. Estandarizar el uso de zimosán como estímulo adicional en la técnica de la 1,2,3-dihidrorrodamina para la evaluación de estallido respiratorio del neutrófilo
Material y métodos. Se obtuvo sangre de cinco sujetos sanos previo consentimiento informado. Se realizó la técnica de dihidrorrodamina (DHR) usando forbol miristato acetato (PMA) como control y diferentes concentraciones de zimosán opsonizado (150, 100, 50, 20 y 10 µg). Obtuvimos por citometría de flujo la intensidad de fluorescencia media (IFM) de la 1,2,3-rodamina en población de neutrófilos y calculamos el índice de oxidación. Se utilizó la prueba de Kolmogorov-Smirnov, ANOVA y análisis post-hoc de Tukey. Consideramos el valor de p=<0.05 como estadísticamente significativo.
Resultados. El PMA produjo incremento de la IFM de 1,2,3-rodamina en los sujetos sanos. Entre las diferentes condiciones de zimosán probadas, identificamos que 50 µg de zimosán fue la cantidad óptima y reproducible en todos los controles por análisis estadístico y hallazgos citométricos.
Conclusiones. Presentamos la optimización de la técnica DHR empleando zimosán. Proponemos su implementación en laboratorios de diagnóstico clínico como parte de la evaluación diagnóstica rutinaria de la EGC.