Obtención, purificación y caracterización de anticuerpos policlonales IgY desarrollados en gallina, dirigidos contra aislamientos colombianos de Giardia duodenalis.

Dabeiba Adriana García, Rubén Santiago Nicholls, Adriana Arévalo, Orlando Torres, Sofía Duque, .

Palabras clave: Giardia, yema de huevo, anticuerpos antiprotozoarios

Resumen

Introducción. El desarrollo de anticuerpos policlonales requiere de animales de laboratorio, generalmente, el conejo, que deben sangrarse para su obtención. Como alternativa, se han utilizado las gallinas. Objetivo. Desarrollar anticuerpos policlonales IgY anti-Giardia duodenalis y evaluar diferentes métodos para su purificación a partir de yema de huevo. Materiales y métodos. Se inmunizaron tres gallinas intramuscularmente con trofozoítos del parásito: las inmunizaciones se realizaron a los 0, 15, 30, 45, 60, 90 y 120 días. Se recolectaron huevos en cada etapa de la inmunización y se purificó la IgY por deslipidación (D) y precipitación (P) mediante cinco protocolos diferentes: M1: (P: sulfato de amonio/D: dextrán sulfato-cloruro de calcio), M2: (D: dextrán sulfato-cloruro de calcio/P: sulfato de amonio), M3: (D: cloroformo/ P: sulfato de amonio 50%), M4: (D: solución A/P:solución B) y M5: (D: cloroformo/P: sulfato de amonio 30%). Se realizó evaluación inmunoquímica de la IgY anti-Giardia duodenalis mediante inmunodifusión, contrainmunoelectroforesis e inmunoelectrotransferencia (Western blot); la pureza de IgY por SDS-PAGE en presencia y ausencia de reductor y la concentración de la inmunoglobulina (mg/mL) por espectrofotometría y densitometría. Resultados. La IgY anti-G. duodenalis mediante evaluación inmunoquímica presentó títulos hasta de 1:32. La inmunoglobulina en ausencia de reductor mostró una banda de 180 kd y en su presencia bandas de 30 y 68 kd, características de sus cadenas liviana y pesada, respectivamente. Las mayores concentraciones de inmunoglobulina se recuperaron con el método dos (M2), 4,6 mg de IgY por mL de yema de partida. Conclusiones. Por su facilidad y economía de producción en gallinas, los anticuerpos policlonales IgY anti-Giardia así obtenidos podrán utilizarse para desarrollar inmunoensayos que detecten el parásito en eluídos de heces.

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  • Dabeiba Adriana García Grupo de Parasitología, Instituto Nacional de Salud, Bogota, DC,
  • Rubén Santiago Nicholls Grupo de Parasitología, Instituto Nacional de Salud, Bogota, DC,
  • Adriana Arévalo Grupo de Parasitología, Instituto Nacional de Salud, Bogota, DC,
  • Orlando Torres Departamento de Microbiología, Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, D.C.
  • Sofía Duque Grupo de Parasitología, Instituto Nacional de Salud, Bogotá, D.C.
Cómo citar
1.
García DA, Nicholls RS, Arévalo A, Torres O, Duque S. Obtención, purificación y caracterización de anticuerpos policlonales IgY desarrollados en gallina, dirigidos contra aislamientos colombianos de Giardia duodenalis. biomedica [Internet]. 1 de diciembre de 2005 [citado 17 de enero de 2021];25(4):451-63. Disponible en: https://revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/1372
Publicado
2005-12-01
Sección
Artículos originales