Caracterización bioquímica de la enzima bifuncional dihidrofolato reductasa-timidilato sintasa de Leishmania (Viannia) y su evaluación como blanco molecular

Edison Osorio, Carolina Aguilera, Nelson Naranjo, Marcel Marin, Carlos Muskus, .

Palabras clave: Leishmania braziliensis, tetrahidrofolato deshidrogenasa, timidilato sintasa, antagonistas del ácido fólico.

Resumen

Introducción. La dihidrofolato reductasa (DHFR) se ha utilizado como blanco molecular en tratamientos antibacterianos, anticancerígenos y antipalúdicos. También, actúa como blanco molecular en Leishmania; sin embargo, no existen reportes de la enzima bifuncional en especies de Leishmania (Viannia).

Materiales y métodos. Se ha aislado y expresado en Escherichia coli el gen que codifica para la enzima bifuncional DHFR y la timidilato-sintasa (TS) de Leishmania braziliensis. La enzima recombinante se purificó y caracterizó, y se evaluó el efecto inhibitorio de algunos antifolatos, así como de cuatro alcaloides aporfínicos.

Resultados. El gen se compone de aproximadamente 1.560 pb y codifica un péptido de 58 kDa que contiene los dominios DHFR y TS ligados en una sola cadena polipeptídica. La enzima recombinante DHFR-TS, utilizando el dihidrofolato (H2F) como sustrato, presentó valores de Km y Vmax de 55,35± 4,02 (media ± el error estándar de la media) y de 0,02 ± 5,34 x 10-4, respectivamente. La enzimar DHFR-TS de L. braziliensis presentó valores de Ki para los antifolatos en el rango de micras. El metotrexato fue el inhibidor más potente de la actividad enzimática (Ki=22,0 mM) en comparación del trimetoprim (Ki=33 mM) y la pirimetamina (Ki=68 mM). Estos valores de Ki son significativamente más bajos en comparación con los obtenidos para los alcaloides aporfínicos.

Conclusión. Los resultados muestran el efecto inhibitorio de los antifolatos sobre la actividad enzimática, lo cual indica que la rDHFR-TS de L. braziliensis podría ser un modelo para estudiar moléculas antiprotozoarias potenciales.

doi: http://dx.doi.org/10.7705/biomedica.v33i3.1434

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  • Edison Osorio Grupo de Investigación en Sustancias Bioactivas, GISB, Facultad de Química Farmacéutica, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia

     

     

  • Carolina Aguilera Grupo de Investigación en Sustancias Bioactivas, GISB, Facultad de Química Farmacéutica, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia Biología de la Conservación y Biotecnología, Facultad de Ciencias Básicas, Corporación Universitaria Santa Rosa de Cabal, Santa Rosa de Cabal, Colombia
  • Nelson Naranjo Programa de Estudio y Control de Enfermedades Tropicales, PECET, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Marcel Marin Programa de Estudio y Control de Enfermedades Tropicales, PECET, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
  • Carlos Muskus Programa de Estudio y Control de Enfermedades Tropicales, PECET, Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia
Cómo citar
Osorio, E., Aguilera, C., Naranjo, N., Marin, M., & Muskus, C. (2013). Caracterización bioquímica de la enzima bifuncional dihidrofolato reductasa-timidilato sintasa de Leishmania (Viannia) y su evaluación como blanco molecular. Biomédica, 33(3), 393-401. https://doi.org/10.7705/biomedica.v33i3.1434
Publicado
2013-09-01
Sección
Artículos originales