Identificación de Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae y Neisseria meningitidis por reacción en cadena de la polimerasa

Eliana Parra, Elizabeth Castañeda, Jaime Moreno, .

Palabras clave: Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, reacción en cadena de la polimerasa, meningitis bacteriana

Resumen

Introducción. Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae y Neisseria meningitidis son los principales patógenos humanos causantes de meningitis.
Objetivo. Se evaluaron los iniciadores omp2, lytA y crgA en el desarrollo de una reacción en cadena de la polimerasa múltiple, para la identificación simultánea de los tres principales microorganismos responsables de la meningitis bacteriana.
Materiales y métodos. Se evaluaron en un formato de PCR múltiple los iniciadores para la proteína de membrana externa (omp2, 1.000 pb) de H. influenzae, la autolisina A (LytA, 395 pb) de S. pneumoniae y el gen regulador de contacto A (cgrA, 230 pb) de N. meningitidis y se determinó la sensibilidad y la especificidad de la técnica.
Resultados. Se obtuvieron resultados reproducibles con una concentración de 50 nM de cada uno de los tres iniciadores y una temperatura de anillamiento de 57°C obteniendo una sensibilidad de 12,5 fg para H. influenzae y S. pnemoniae y de 3,12 fg para N. meningitidis. No se presentaron reacciones cruzadas con otros microorganismos causantes de meningitis o relacionados con los géneros.
Conclusión. Los resultados de sensibilidad y especificidad sugieren que los iniciadores evaluados pueden ser utilizados para el desarrollo de una PCR en formato múltiple que permita la identificación de los tres principales patógenos causantes de meningitis.

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  • Eliana Parra Grupo de Microbiología, Instituto Nacional de Salud, Bogotá D. C., Colombia
  • Elizabeth Castañeda Grupo de Microbiología, Instituto Nacional de Salud, Bogotá D. C., Colombia
  • Jaime Moreno Grupo de Microbiología, Instituto Nacional de Salud, Bogotá D. C., Colombia

Citas

1. Zwijnenburg PJ, van der Poll T, Roord JJ, van Furth AM. Chemotactic factors in cerebrospinal fluid during bacterial meningitis. Infec Immun. 2006;74:1445-51.
2. Bartfield AA. Bacterial meningitis. Prim Care Update Ob Gyns. 2000;7:49-54.
3. Saez LX, McCracken GH. Bacterial meningitis in children. Lancet. 2003;361:2139-48.
4. Gutiérrez CE. infecciones por Haemophilus influenzae en la población pediátrica. Biomédica. 2001;21:369-88.
5. Dagan R, Englehad D, Piccar E, Engelhard D, Israeli Pediatric Bacteremia and Meningitis Group. Epidemiology of invasive childhood pneumococcal infections in Israel. JAMA. 1992;268:3328-32.
6. Weisfelt M, de Gans J, van der Poll T, ven de Beek D. Pneumococcal meningitis in adults: new approaches to management and prevention. Lancet Neurol. 2006;5:332-42.
7. Lee SO, Ryu SH, Park SJ, Ryu J, Woo JH, Kim YS. Meningococcal disease in the Republic of Korea army: incidence and serogroups determined by PCR. J Korean Med Sci. 2003;18:163-6.
8. Pathan N, Faust SN, Levin M. Pathophysiology of meningococcal meningitis and septicaemia. Arch Dis Child. 2003;88:601-7.
9. Gray L, Fedorko D. Laboratory diagnosis of bacterial meningitis. Clin Microbiol Rev. 1992;5:130-45.
10. Correa A, Echavarría E, Estrada S, Lopera T, Ortis LE, Uribe MV, et al. Taller sobre meningitis bacteriana aguda. Infectio. 2001;5:31-4.
11. Tunkel AR, Hartman BJ, Kaplan SL, Kaufman BA, Roos KL, Scheld WM, et al. Practice guidelines for the management of bacterial meningitis. Clin Infect Dis. 2004;39:1267-84.
12. Overturf GD. Defining bacterial meningitis and other infections of the central nervous system. Pediatr Crit Care Med. 2005;6(3 Suppl.):14-8.
13. Louie M, Louie L, Simor AE. The role of DNA amplification technology in the diagnosis of infectious diseases. CMAJ. 2000;163:301-9.
14. Pitcher D, Saunders N, Owen R. Rapid extraction of bacterial genomic DNA with guanidium thiocyanate. Letts Appl Microbiol. 1989;8:151-6.
15. Forbes K, Bruce K, Ball A, Penniington T. Variation in length and sequence of porin (omp2) alleles of noncapsulate Haemophilus influenzae. Mol Microbiol. 1992;6:2107-12.
16. Messmer TO, Sampson JS, Stinson A, Wong B, Carlone GM, Facklam RR. Comparison of four polymerase chain reaction assays for specificity in the identification of Streptococcus pneumoniae. Diagn Microbiol Infect Dis. 2004;49:249-54.
17. Taha MK. Simultaneous approach for nonculture PCR based identification and serogroup prediction of N. meningitidis. J Clin Microbiol. 2000;38:855-7.
18. NCBI. BLAST. [Consultada: julio 13 de 2006]. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST.
19. DNASTAR. Software for molecular biology [Consultada: julio 13 de 2006]. Disponible en: http://www.dnastar.com.
20. University of Helsinky. FastPCR © 1998-2007 (for Windows). [Consultada: julio 13 de 2006]. Disponible en: http://www.biocenter.helsinki.fi/bi/Programs/fastpcr.htm.
21. Falla TJ, Crook DW, Brophy LN, Maskell D, Kroll JS, Moxon ER. PCR for capsular typing of Haemophilus influenzae. J Clin Microbiol. 1994;32: 2382-6.
22. Hobson RP, Williams A, Rawal K, Pennington TH, Forbes KJ. Incidence and spread of Haemophilus influenzae on an Antarctic base determined using the polymerase chain reaction. Epidemiol Infect.
1994;114:93-103.
23. Uzuka R, Kawashima H, Hasegama D, Ioi H, Amaha M, Kashiwagi Y, et al. Rapid diagnosis of bacterial meningitis by using multiplex PCR and real time PCR. Pediatr Int. 2004;46:551-4.
24. Corless CE, Guiver M, Borrow R, Edwards-Jones V, Fox AJ, Kaczmarski EB. Simultaneous detection of Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, and Streptococcus pneumoniae in suspected cases of meningitis and septicemia using real-time PCR. J Clin Microbiol. 2001;39:1553-8.
25. Chanteau S, Sidikou F, Djibo S, Moussa A, Mindadou, H, Boisier P. Scaling up of PCR-based surveillance of bacterial meningitis in the African meningitis belt: indisputable benefits of multiplex PCR assay in Niger. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2006;100:677-80.
26. Schoske R, Vallone PM, Ruitberg CM, Butler JM. Multiplex PCR design strategy used for the simultaneous amplification of 10 Y chromosome short tandem repeat (STR) loci. Anal Bioanal Chem. 2003;375:333-43.
27. Henegariu O, Heerema NA, Dlouhy SR, Vance GM, Vogt PH. Multiplex PCR: critical parameters and stepby- step protocol. Biotechniques. 1997;23:504-11.
Cómo citar
Parra, E., Castañeda, E., & Moreno, J. (1). Identificación de Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae y Neisseria meningitidis por reacción en cadena de la polimerasa. Biomédica, 27(3), 454-60. https://doi.org/10.7705/biomedica.v27i3.208

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