Evaluación de tres PCR cuantitativas para la detección de leptospiras patógenas en animales domésticos en Nicaragua

Byron Flores, Nabil Halaihel , Tania Pérez-Sánchez , Jessica Sheleby-Elías , Brenda Mora , Héctor Fuertes , William Jirón , .

Palabras clave: Leptospira, reacción en cadena de la polimerasa, animales domésticos, Nicaragua, leptospirosis/diagnóstico

Resumen

Introducción. En Nicaragua es necesario estandarizar pruebas moleculares como la PCR en tiempo real (quantitative Polymerase Chain Reaction, qPCR) que mejoren el diagnóstico de leptospirosis en humanos y animales.
Objetivo. Evaluar tres qPCR para la detección de leptospiras patógenas en animales domésticos de Nicaragua.
Materiales y métodos. Se diseñaron cebadores para la amplificación del gen LipL32 en SYBR Green (SYBR Green-A) y TaqMan, y en otros descritos previamente (SYBR Green-B). Las secuencias de 12 cepas obtenidas de la base de datos del National Center for Biotechnology Information (NCBI) se alinearon para la búsqueda de sondas y cebadores. La sensibilidad analítica se determinó calculando el equivalente genómico detectable, se utilizaron 18 cepas de referencia para la sensibilidad diagnóstica y 28 controles negativos para la especificidad. Los métodos se aplicaron en 129 muestras de orina de animales domésticos.
Resultados. En SYBR Green-A se obtuvo un límite de detección de cuatro equivalentes genómicos; en TaqMan, la sensibilidad fue del 94,4 % (IC95% 81,1-100,0). Con SYBR Green-A, se obtuvo una sensibilidad del 77,8 % (IC95% 55,8-99,8), en tanto que con SYBR Green-B fue del 61,1 % (IC95% 35,8-86,4). En las tres pruebas se logró una especificidad del 100 % (IC95% 98,2-100,0). El 26,4 % de las muestras de animales domésticos fueron positivas con SYBR Green-A y el 6,2 % con SYBR Green-B.
Conclusiones. El SYBR Green-A presentó un límite de detección bajo, en tanto que las tres técnicas evaluadas mostraron alta especificidad, en tanto que la TaqMan tuvo la mayor sensibilidad.

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  • Byron Flores Centro Veterinario de Diagnóstico e Investigación, Escuela de Ciencias Agrarias y Veterinarias, Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua, León, Nicaragua; Departamento de Patología Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad de Zaragoza, Zaragoza, España https://orcid.org/0000-0002-1932-3227
  • Nabil Halaihel Departamento de Patología Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad de Zaragoza, Zaragoza, España https://orcid.org/0000-0002-4121-8087
  • Tania Pérez-Sánchez Departamento de Patología Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad de Zaragoza, Zaragoza, España https://orcid.org/0000-0003-2125-6016
  • Jessica Sheleby-Elías Centro Veterinario de Diagnóstico e Investigación, Escuela de Ciencias Agrarias y Veterinarias, Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua, León, Nicaragua https://orcid.org/0000-0001-7370-5763
  • Brenda Mora Centro Veterinario de Diagnóstico e Investigación, Escuela de Ciencias Agrarias y Veterinarias, Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua, León, Nicaragua; Departamento de Patología Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad de Zaragoza, Zaragoza, España https://orcid.org/0000-0003-2042-927X
  • Héctor Fuertes Departamento de Patología Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad de Zaragoza, Zaragoza, España https://orcid.org/0000-0003-1690-5034
  • William Jirón Centro Veterinario de Diagnóstico e Investigación, Escuela de Ciencias Agrarias y Veterinarias, Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua, León, Nicaragua https://orcid.org/0000-0002-5778-5721

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Cómo citar
1.
Flores B, Halaihel N, Pérez-Sánchez T, Sheleby-Elías J, Mora B, Fuertes H, Jirón W. Evaluación de tres PCR cuantitativas para la detección de leptospiras patógenas en animales domésticos en Nicaragua. biomedica [Internet]. 2 de diciembre de 2020 [citado 19 de enero de 2021];40(4):673-81. Disponible en: https://revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/5170
Publicado
2020-12-02
Sección
Artículos originales
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